發(fā)布時(shí)間： 2022-02-21 點(diǎn)擊次數(shù)： 1757次
離心機(jī)是利用離心力，分離液體與固體顆粒或液體與液體的混合物中各組分的機(jī)械。離心機(jī)主要用于將懸浮液中的固體顆粒與液體分開(kāi)，或?qū)⑷闈嵋褐袃煞N密度不同，又互不相溶的液體分開(kāi)（例如從牛奶中分離出奶油）；它也可用于排除濕固體中的液體，例如用洗衣機(jī)甩干濕衣服；特殊的超速管式分離機(jī)還可分離不同密度的氣體混合物；利用不同密度或粒度的固體顆粒在液體中沉降速度不同的特點(diǎn)，有的沉降離心機(jī)還可對(duì)固體顆粒按密度或粒度進(jìn)行分級(jí)。
離心機(jī)應(yīng)用一直強(qiáng)調(diào)的是——應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)需要選擇合適的離心機(jī)。
高速，低速，迷你還是大容量，都是要根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)來(lái)選擇得。
比如常見(jiàn)的質(zhì)粒DNA的分離、純化研究就需要離心機(jī)，而且不同的實(shí)驗(yàn)方式離心機(jī)種類(lèi)還不一樣。
詳細(xì)講解如下：
一、細(xì)菌的培養(yǎng)和收集
將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50ug/ml Amp)中, 37C培養(yǎng)12-24小時(shí)。用無(wú)菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50ug/ml Amp)中,37°C振蕩培養(yǎng)約12小時(shí)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期。
二、質(zhì)粒DNA少量快速提取
質(zhì)粒DNA小量提取法對(duì)于從大星轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，能同時(shí)處理大星試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
(—)、煮沸法：
1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入離心管中,4C下12000 g微量離心機(jī)離心30秒。2、棄上清，將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘，使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中,渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml)，渦旋振蕩3秒鐘。5、將離心管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無(wú)菌牙簽從離心管中去除細(xì)菌碎片。8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。
[注意]1.對(duì)大腸桿菌可從固體培養(yǎng)基上挑取單個(gè)菌落直接進(jìn)行煮沸法提取質(zhì)粒DNA.
?、仓蠓蟹ㄖ刑砑尤芫赣些ざㄏ薅?濃度高時(shí),細(xì)菌裂解效果反而不好。有時(shí)不同溶菌酶也能溶菌。
3.提取的質(zhì)粒DNA中會(huì)含有RNA,但RNA并不干擾進(jìn)一步實(shí)驗(yàn),如限制性?xún)?nèi)切酶消化,亞克隆及連接反應(yīng)等。
(二)少量DNA純化系統(tǒng)
的少量DNA純化系統(tǒng)可快速有效的抽提質(zhì)粒DNA,整個(gè)過(guò)程只需15分鐘。提取的質(zhì)?？芍苯佑糜贒NA測(cè)序、酶切分析體外轉(zhuǎn)錄等。
該系統(tǒng)中所含試劑和柱子可以用于50次1-3ml質(zhì)粒培養(yǎng)液的分離和純化，試劑包括10ml細(xì)胞懸浮液，10ml細(xì)胞裂解液;10ml中和液，50ml/izard少量DNA純化樹(shù)脂，50ml柱洗液（使用前加95%乙醇至120ml )和50支微型柱。
1、1-3ml過(guò)夜培養(yǎng)細(xì)胞液4C下12000g臺(tái)式高數(shù)離心機(jī)離心1-2分鐘。
2、去除上清液，菌體細(xì)胞懸浮于200ul細(xì)胞懸浮液中,充分混合,并移入離心管中。3、加200ul細(xì)胞裂解液,顛倒離心管數(shù)次,直到溶液變清亮。
4、加200ul中和液,顛倒離心管數(shù)次。
5、4℃下12000g離心5分鐘，取上清液于新的離心管中。6、加1ml 少量DNA純化樹(shù)脂,顛倒離心管數(shù)次以充分混勻。
7、取一次性注射器,取出注塞,并使注射筒與微型柱連接,用移液槍將上述混合液加入注射筒中;,并用注塞輕推,使混合物進(jìn)入微型柱。8、將注射器與微型柱分開(kāi),取出注塞,再將注射簡(jiǎn)與微型柱相連;加入2ml柱洗液,并用注塞輕推，使柱洗液進(jìn)入微型柱。
9、取出微型柱置于離心管中,離心2分鐘以除去微型柱中的柱洗液。
10、將微型柱放在一個(gè)新離心管中，加50pulTE(或水)于微型柱中，靜止1分鐘后，4℃下12000g臺(tái)式高數(shù)離心機(jī)離心20秒。11、丟棄微型柱，將離心管中的質(zhì)粒DNA貯于4℃或-20°℃冰箱。
以上就是關(guān)于離心機(jī)在不同質(zhì)粒DNA分離、純化研究中選擇不同的講解，所以在選購(gòu)離心機(jī)的時(shí)候，要多跟離心機(jī)廠家溝通，購(gòu)買(mǎi)合適自己的離心機(jī)，以免造成資源浪費(fèi)。
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